西安午夜草莓app下载生物科技有限公司 主營:草莓视频污无线看生物圍繞熒光發光、熒光標記、熒光探針等技術進行產品研發,公司產品廣泛用於核酸蛋白定量、細胞凋亡研究、細胞信號通路研究、細胞及線粒體膜電位檢測、細胞器染色、活體示蹤、抗體標記等科研領域。
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技術文章

鈣離子熒光探針Rhod-2, AM

鈣離子熒光探針Rhod-2, AM

貨號                           21063                        存儲條件                           f/l                                    
規格 50 mg 價格 62376
Ex (nm) 552 Em (nm) 576
分子量 1123.96 溶劑 DMSO
產品詳細介紹

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簡要概述

        鈣離子熒光探針Rhod-2, AM是美國AAT Bioquest研發的用於鈣通量測定的試劑,鈣通量測定是用於篩選G蛋白偶聯受體(GPCR)的**發現中的優選方法。 小草莓破解版视频成年人的Fluo-8®和Rhod-4 係列鈣檢測試劑是*亮的綠色和紅色鈣指示劑,而午夜草莓app下载的Cal-520®和Cal-590 具有*高的細胞內鈣檢測信號/背景比,因為它們具有出色的保留 活細胞。 AAT Bioquest以*高質量提供其他鈣指標,如Fluo-4,Fluo-3,Fura-2,Indo-1,Rhod-5N和Rhod-2 AM,草莓视频成视频app生物是AAT Bioquest 的中國代理商,為您提供*上等的鈣離子熒光探針。

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產品說明書

操作步驟

1.使用鈣指示劑AM Esters加載細胞:

        AM酯是非極性酯,其易於穿過活細胞膜,並且通過活細胞內的細胞酯酶快速水解。 AM酯廣泛用於非侵入性地將各種極性熒光探針裝載到活細胞中。 但是,使用AM酯時必須小心,因為它們易於水解,特別是在溶液中。 它們應該用高質量的無水二甲基亞碸(DMSO)重新配製。 DMSO儲備溶液應在-20°C下幹燥儲存並避光。 在這些條件下,AM酯應穩定數月。

以下是草莓视频成视频app推薦的將AM酯加載到活細胞中的方案。 該方案僅提供指南,實際應根據您的具體需求進行修改。


a)在高質量無水DMSO中製備2至5 mM AM酯原液。

b)在實驗當天,將鈣指示劑溶解在DMSO中或將等份的指示劑儲備溶液解凍至室溫。使用0.02%Pluronic®F-127在您選擇的緩衝液(如Hanks和Hepes緩衝液)中製備1至10μM的工作溶液。對於大多數細胞係,草莓视频污无线看建議鈣指示劑的*終濃度為4-5 uM。細胞加載所需指標的確切濃度必須根據經驗確定。為避免因過載和潛在染料毒性引起的任何偽影,建議使用可產生足夠信號強度的*小探針濃度。

c)如果您的細胞含有有機陰離子轉運蛋白,可以在細胞培養基中加入丙磺舒(1-2.5 mM)或磺吡酮(0.1-0.25 mM),以減少脫酯化指標的泄漏。在室溫或37°C下用鈣指示劑酯孵育細胞20分鍾至1小時。

d)在HHBS或您選擇的緩衝液(含有陰離子轉運蛋白抑製劑,如2.5mM丙磺舒,如果適用)中洗滌細胞1-2次以除去過量的探針。

e)在所需的Ex / Em波長下進行實驗。


2.測量細胞內鈣響應:

 

        為了確定溶液的遊離鈣濃度或單波長鈣指示劑的Kd,使用等式:[Ca]free = Kd[F - Fmin]/Fmax - F]

        其中F是實驗鈣水平下指示劑的熒光,Fmin是不存在鈣時的熒光,Fmax是鈣飽和探針的熒光。 解離常數(Kd)是探針對鈣的親和力的量度。 與校準溶液相比,熒光指示劑的Ca2 +結合和光譜性質在細胞環境中變化非常顯著。 細胞內指標的原位校準通常產生顯著高於體外測定的Kd值。 通過在離子載體如A-23187,4-溴A-23187和離子黴素存在下將加載的細胞暴露於受控的Ca 2+緩衝液來進行原位校準。 或者,細胞透化劑如洋地黃皂苷或X-100可用於將指示劑暴露於細胞外培養基的受控Ca2 +水平。 說明書中的表1列出了一些鈣試劑的Kd值供您參考。

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